牛乳腺上皮细胞的分离纯化培养及鉴定
剪取新鲜的牛乳腺组织切除脂肪及结缔组织并用灭菌 PBS 洗涤,剪切并吹打分散培养,胰酶消化除去成纤维细胞,继续培养。用免疫荧光染色法鉴定纯化后的乳腺细胞中角蛋白 18 的表达。将纯化的乳腺上皮细胞加入有盖玻片的培养板中培养,以 4%多聚甲醛固定 10 min,洗涤 3 次。封闭 30 min,PBS 洗涤 3 次。加入 1﹕100 兔抗角蛋白 18 抗体,37 °C 孵育 1 h,洗涤 3 次。1∶100 FITC-山羊抗兔 IgG 抗体,37 °C 作用 1 h,洗涤 3 次,荧光显微镜观察。
685 人阅读发布时间:2020-04-23 17:12