豚鼠组胺(HIS)酶联免疫elisa分析试剂盒如何操作以获得准确结果

       豚鼠组胺（HIS）酶联免疫ELISA分析试剂盒在生物医学研究领域展现出广阔的应用前景。随着免疫学技术的不断发展，该试剂盒的检测灵敏度和特异性得到了显著提升，为科研人员提供了更加可靠的实验工具。以下是豚鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒的标准操作流程及关键注意事项，结合多份高可信度来源整理而成：

一、实验前准备
‌试剂准备‌

将试剂盒平衡至室温20-25℃（至少30分钟）‌

标准品按说明书梯度稀释（常见浓度梯度：16/8/4/2/1/0 ng/mL）‌

未使用的板条需密封保存于4℃‌

‌样本处理‌

‌血清/血浆‌：室温凝固10-20分钟后，2000-3000转/分离心20分钟，取上清‌

‌组织样本‌：PBS匀浆后离心取上清（避免反复冻融）‌

‌尿液/细胞上清‌：直接离心去除颗粒‌

二、实验流程（双抗体夹心法）
‌加样孵育‌

每孔加入100μL标准品/样本，37℃避光孵育90分钟‌

‌洗板操作‌

洗液洗涤5次，每次30秒，拍干残留液体‌

‌抗体反应‌

加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟‌

‌酶标记检测‌

加入100μL酶结合物工作液，37℃孵育30分钟‌

‌显色终止‌

加入TMB底物避光显色15分钟，50μL终止液终止反应‌

三、关键注意事项
‌批次一致性‌
长期实验应使用同一批次试剂盒‌

‌样本保存‌

血清/血浆：2-8℃保存≤1天，-20℃长期保存‌

避免反复冻融（最多冻融3次）‌

‌干扰因素控制‌

补体干扰：建议使用EDTA抗凝血浆‌

‌数据分析‌

450nm波长读取OD值（建议630nm校正）‌

使用四参数逻辑回归拟合标准曲线‌
四、异常结果处理
‌假阳性‌

可能原因：类风湿因子、补体干扰‌

解决方案：样本预处理（热变性IgG）‌

‌假阴性‌

可能原因：样本保存不当/抗体失活‌
1解决方案：验证抗体活性，缩短样本保存时间