ELISA的非特异性干扰有哪些

   ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫测定法，但在检测过程中可能会遇到非特异性干扰的问题。非特异性干扰主要分为内源性和外源性两大类，以下是具体的干扰因素：

一、内源性干扰物质
‌类风湿因子（RF）‌
人血清中的IgM/IgG型RF可与固相抗体及酶标二抗的Fc段直接结合，导致假阳性。解决方案包括使用F(ab)₂片段抗体、热变性IgG吸附剂处理标本，或添加降解RF。
‌补体干扰‌
补体C1q可桥连固相抗体与酶标二抗的Fc段，引起假阳性。可通过EDTA稀释样本或56℃加热灭活C1q消除干扰。
‌嗜异性抗体‌
人类血清中天然存在的抗体能与啮齿动物Ig结合，造成假阳性。需在稀释液中加入过量动物Ig(s)阻断。
‌嗜靶抗原自身抗体‌
如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等自身抗体，可与靶抗原形成复合物干扰检测。需通过理化方法解离复合物后再检测。
‌医源性抗鼠抗体‌
接受鼠源性单抗治疗或动物咬伤患者体内产生的抗鼠抗体可导致假阳性。需在标本中加入正常鼠Ig(s)阻断。
‌交叉反应物质‌
类AFP等与靶抗原有交叉反应的物质，使用单抗检测时可能假阳性。

二、外源性干扰因素
‌标本溶血‌
红细胞释放的亚铁血红素具有类过氧化物酶活性，催化底物显色（假阳性）。严重溶血样本应弃用。
‌细菌污染‌
细菌内源性酶（如辣根过氧化物酶）可催化底物产生非特异性显色。
‌标本处理不当‌
抗凝不完全导致纤维蛋白残留，洗涤不彻底时酶残留引起假阳性；反复冻融或长期保存致蛋白降解。需充分离心（>3000rpm, 10min）、新鲜检测或分装冻存。
‌抗凝剂干扰‌
肝素抗凝血浆增加OD值，EDTA或NaN₃抑制辣根过氧化物酶活性。
三、其他干扰因素
‌疾病与年龄因素‌：类风湿关节炎、红斑狼疮等疾病患者的嗜异性抗体，或老年人异常蛋白质均可干扰结果。
‌操作因素‌：加样误差、洗板不充分等亦可引入干扰。
干扰识别与处理策略
‌识别方法‌：梯度稀释回收试验、不同检测系统比对、阻断试验（如加入动物Ig）。
‌金标准方法‌：凝胶过滤层析鉴定大分子干扰物（如巨分子TSH）。
‌通用阻断剂‌：专用免疫阻断剂可同时抑制RF、嗜异性抗体等干扰。
了解这些非特异性干扰因素有助于在ELISA实验中采取相应的措施来减少干扰，提高检测的准确性和可靠性。