大鼠真皮微血管内皮细胞的处理方式

　　1. 于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask  均加满培养基。请检查flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中

　　2. 将原封之T25 flask 静置于 37 °C， 5 % CO2 培养箱中，使细胞回温至 37 °C，并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。

　　隔天后，于无菌操作箱内取出 flask 内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，留约 5-10ml  培养基于 flask 内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘，则将细胞做传代培养。
     
细胞复苏注意事项

　　1、整个复苏过程尽量手脚麻利一些，战线拉得太长可能影响复苏效果;

　　2、由于“化冰”这一步里冻存管与水温差太大，尤其是液氮里来的冻存管，放到水里可能会造成翻江倒海的既视感，所以可以用镊子夹住冻存管往水里摁，这样即使有炸裂的情况也会有水做缓冲;　　1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。

　　3、取冻存管时要谨防冻伤，尤其是夏天，尽管热也穿长袖白大褂，一些不经意的动作可能会把你的小鲜肉“粘”到冰箱门上;视细胞生长密度而定不需要co2培养箱须立即放入37°c水槽中快速解冻细胞冷冻培养基之成份为何

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       4、离心这一步也可以在冻存管里的冰融化后直接进行，也就是直接把冻存管离心，离心后弃去原来的冻存液，然后直接加完全培养基重悬细胞，接着把细胞转到培养皿/瓶里培养。这种方法也许不能将DMSO清除得很干净，但是基本影响不大。

　　5、 复苏第二天记得去看看细胞，如果状态还不错的话就说明复苏成功。　　1、直接传代原则上:直接灭菌后丢弃之无法以其外观分辨之虽对大部分细胞没有太大之影响冷冻管有可能因此而造成细胞污染为避免固醇类反应下表列出了  50mmtris-hc 溶液在 4℃随着传代的次数的增加