乙型肝炎病毒ccc DNA (HBV-cccDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)反应五要素

乙型肝炎病毒ccc DNA (HBV-cccDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
       
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
杂交瘤（B类）；C3110D2E11
杂交瘤（B类）；Z1510A2G6A2C7
杂交瘤（B类）；Z172A4C4C6F3G12
大鼠源细胞
大鼠垂体瘤细胞；GH3
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞；PC-12 [PC12]
大鼠垂体瘤细胞；MMQ
大鼠小肠隐窝上皮细胞；IEC-6
大鼠脑胶质瘤细胞；C6
大鼠肝细胞；IAR20
大鼠气管上皮细胞；RTE
大鼠肝细胞瘤；H-4-II-E
大鼠肝细胞瘤；H4-II-E-C3
大鼠骨骼肌成肌细胞；L6
正常大鼠肾细胞；NRK
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-1
大鼠胚胎心肌细胞；H9c2(2-1)
大鼠骨髓瘤细胞；IR983F
Walker氏癌肉瘤256瘤株；W256
大鼠肾小球系膜细胞；HBZY-1
大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-1
大鼠胰岛β细胞瘤细胞；RIN-m5F
正常大鼠肾细胞；NRK
正常大鼠肾细胞（EGF受体阳性）；NRK49F
大鼠肾系膜细胞；RMC
大鼠脑胶质瘤细胞；C6
大鼠肝细胞；BRL
正常大鼠肾细胞；NRK
大鼠肝细胞；BRL 3A
大鼠骨骼肌成肌细胞；L6
大鼠胚胎心肌细胞；H9c2(2-1)
大鼠雪旺细胞；RSC96
大鼠胸大动脉平滑肌细胞；A7r5
正常大鼠肾细胞；NRK-52E
大鼠肺泡巨噬细胞；NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]
大鼠肝细胞；BRL 3A
大鼠脑胶质瘤细胞；C6
大鼠肝癌细胞；CBRH-7919 [CBRH7919]
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞；PC-12 [PC12]
大鼠肝癌细胞；RH-35
大鼠乳腺癌细胞；SHZ-88
大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞；AR42J
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-2H3