详解ELISA检测抗体抗原

竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗 HBc  ELISA  一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。
竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等 ELISA  测定多用此法。
捕获包被法测抗体
IgM  抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法 ELISA  一般仅适用于检测总抗体或IgG  抗体。如用抗原包被的间接法直接测定  IgM  抗体，因标本中一般同时存在较高浓度的IgG  抗体，后者将竞争结合固相抗原而使一部份  IgM  抗体不能结合到固相上。因此如用抗人 IgM  作为二抗，间接测定 IgM  抗体，必须先将标本用 A  蛋白或抗 IgG  抗体处理，以除去  IgG  的干扰。在临床检验中测定抗体  IgM  时多采用捕获包被法。先用抗人  IgM  抗体包被固相，以捕获血清标本中的  IgM（其中包括针对抗原的特异性  IgM  抗体和非特异性的IgM）。然后加入抗原，此抗原仅与特异性  IgM  相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标本中的 IgM  成正相关。此法常用于病毒性质感染的早期诊断。
甲型肝炎病毒（HAV）
类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定 IgM  抗体，导致假阳性反应。因此中和 IgG  的间接法近来颇受青睐，用这类试剂检测抗 CMV IgGM  和抗弓形虫 IgM  抗体已获成功
ABS­ELISA法
ABS  为亲和素(avidin)  生物素(biotin)  系统(system)  的略语。亲和素是一种糖蛋白，分子量60000，每个分子由 4  个能和生物素结合的亚基组成。生物素为小分子化合物，分子量 244。用化学方法制成的衍生物素­羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物，标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性，其亲和力较抗原抗体反应大得多，两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与4个生物素分子结合，因此如把 ABS与ELISA  法可分为酶标记亲和素­生物素（LAB）法和桥联亲和素­生物素（ABC）法两种类型。两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系统中的酶标抗体（抗原）。在 LAB中，固相生物素先与不标记的亲和素反应，然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期，亲和素从蛋清中提取，这种卵亲和素为碱性糖蛋白，与聚苯乙烯载体的吸附性很强，用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点，在 ELISA  应用中有替代前者的趋势。由于 ABS­ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS­ELISA应用不多。

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