c使用指南：适用边界、储存与操作要点

一、核心适用边界
本类LAMELISA试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验，用于体外定量检测人血清、血浆、尿液、细胞培养上清、组织匀浆等样本中的脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）含量，‌科研版仅可用于基础研究，绝对不能直接作为临床诊断依据‌，临床版需在合规资质下用于结核病辅助筛查。

适用场景：结核感染相关基础研究、大规模人群结核感染流行病学初筛、HIV合并结核感染的辅助排查、肺外结核的实验室指标监测。
禁用场景：直接作为结核病临床确诊的依据、检测含（NaN₃）的样本（会直接抑制HRP酶活性导致结果完全失效）、检测经过反复冻融超过3次的严重降解样本。
二、规范储存与运输要求
‌常规储存条件‌：所有未开封试剂统一置于‌2-8℃‌环境避光密封保存，禁止冷冻，否则会导致酶结合物失活、包被抗体从板壁脱落，试剂盒整体有效期为6个月。
‌开封后储存‌：实验中未使用的剩余板条需立即放回原铝箔密封袋中，挤出袋内空气后重新密封，继续置于2-8℃储存，1个月内使用完毕；稀释后的浓缩洗涤液可在2-8℃短期存放7天，过期需重新配制。
‌运输要求‌：全程采用2-8℃低温冷链运输，包装内置生物冰袋，避免高温暴晒导致试剂提前失活。若收到LAMELISA试剂盒时发现冰袋完全融化、试剂温度明显高于室温，需立即核查试剂活性后再使用。

三、关键操作核心要点
1. 实验前准备
所有试剂使用前需提前从冰箱取出，置于室温环境平衡‌30分钟‌，避免低温试剂影响抗原-抗体结合效率。若20×浓缩洗涤液出现结晶，可置于37℃水浴中温和助溶，待晶体完全溶解后，用去离子水按1:20比例稀释成1×工作液。
提前10分钟配制生物素化抗体工作液和SA-HRP酶结合物工作液，所有稀释操作严格使用试剂盒配套的专用稀释液，不可用PBS等其他缓冲液替代。

2. 样本处理规范
血清样本：室温血液自然凝固15-20分钟后，2000-3000转/分离心20分钟，仔细收集上清液，若储存过程中出现沉淀需再次离心。
尿液/脑脊液样本：无菌管收集后直接2000-3000转/分离心20分钟，取上清检测，避免尿液中的杂质干扰显色结果。
组织样本：称重后加入预冷的pH7.4 PBS缓冲液，用匀浆器充分研磨，2000-3000转/分离心20分钟取上清，分装后-20℃冻存，避免反复冻融。
3. 加样与孵育控制
加样时每更换一个标准品或待测样本必须更换全新的移液器枪头，杜绝交叉污染。所有加样顺序保持完全一致，确保所有反应孔的孵育时长完全相同。
孵育过程中必须用专用封板膜将酶标板完全密封，置于37℃恒温环境孵育，避免液体蒸发导致孔内体系体积变化，影响OD值准确性。

4. 洗板与显色质控
每孔加入300-350μL稀释后的洗涤缓冲液，浸泡30秒后彻底吸净孔内液体，重复洗板4-5次，洗完后将酶标板倒扣在洁净吸水纸上轻拍至无明显液体残留，避免残留洗涤液中和后续加入的终止液。
TMB显色剂需全程避光保存，加入显色剂后严格避光孵育10-15分钟，待标准曲线最高浓度孔显明显深蓝色后，立即按与显色剂完全相同的顺序加入终止液终止反应，此时孔内颜色会从蓝色变为黄色，若出现绿色说明液体未充分混匀，需快速轻拍板壁混匀。

5. 读数与结果计算
终止反应完成后15分钟内，使用酶标仪在‌450nm波长‌下读取各孔OD值，优先采用四参数逻辑函数（4PL）拟合标准曲线，确保标准曲线相关系数R²≥0.98。若待测样本OD值超出标准曲线上限，需用样本稀释液按比例稀释后重新检测，最终结果计算时乘以对应的稀释倍数。

四、安全操作注意事项
试剂盒配套的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，操作时需佩戴防护手套，避免直接接触皮肤和黏膜；实验全程禁止吃喝、抽烟，绝对不能用嘴直接吸取任何试剂组分。