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8 人阅读发布时间:2026-06-04 15:18
核心结果:不同降解方法对应的ACA11重新合成时间不同,以最常用的Trim-Away方法为例,降解后最快3小时即可检测到新合成的蛋白,24~48小时恢复到接近降解前水平,具体不同方法的时间规律如下:
1. Trim-Away瞬时降解(蛋白水平直接降解)
重新合成起始时间:降解完成后3~6小时即可检测到新合成的ACA11蛋白;
恢复到实验可检测水平:24小时可恢复降解前的40%~60%,24~48小时恢复到60%~80%;
完全恢复:一般3天可回到降解前的基础表达水平。
2. PROTAC化学降解(蛋白水平降解)
若仅单次给药,清除PROTAC后:6~12小时开始检测到新合成蛋白,48~72小时恢复到基础水平;
若持续给药维持PROTAC浓度,合成的新蛋白会被持续降解,不会恢复表达。
3. RNA干扰(RNAi)转录水平敲低
降解/敲低效应消失后才会开始重新合成:一般siRNA转染后7~10天,siRNA被细胞完全降解,转录翻译阻断效应消失,才会逐步开始重新合成,2周左右恢复到基础表达水平。
4. CRISPR基因敲除
直接敲除编码基因,细胞丧失合成能力,永远不会重新合成。
5. 提取后体外样本降解
已经离开活细胞转录翻译体系,没有合成条件,永远不会重新合成。