ELISA（酶联免疫吸附测定）结果偏低因素

ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种高灵敏度、高特异性的蛋白定量技术，广泛应用于科研与临床检测中。然而，实验过程中若出现OD值或浓度结果偏低的情况，可能会影响数据的准确性和可重复性。
🔍 常见原因分类与对策
样本相关因素

样本制备方法错误（如血清、血浆、细胞裂解液处理方式不同）可能导致目标蛋白损失。
保存温度不当（未分装于-20℃或-80℃）、储存时间过长或经历反复冻融，均可导致目标蛋白降解。
血清分离时未在室温充分凝固，或使用低温冷藏血液采集，可能导致IgM/IgG活性丧失。
试剂与试剂盒因素

试剂盒组分未按要求保存（如检测液A/B需-20℃，稀释液需4℃），会导致抗体或酶活性下降。
试剂未平衡至室温即使用，影响反应效率。
标准品降解或复溶不完全，造成标准曲线异常，间接影响样本读数。
洗液被污染或含有酶抑制剂（如叠氮钠），会干扰HRP等酶的催化反应。 
稀释与检测方案问题

稀释过度：照搬文献推荐稀释倍数而未做预实验，导致样本OD值落在检测范围之外。
稀释不足引发钩状效应（后带效应）：抗原过量使抗原-抗体比例失衡，产生假阴性结果。
基质效应干扰：复杂样本基质（如血清中的脂质、胆红素）可能抑制抗原抗体结合。
操作过程失误

孵育时间不足或温度不稳定，影响抗原抗体结合效率。
洗涤次数过多、浸泡时间过长或洗板不彻底，导致非特异性结合或信号丢失。
显色时间过短或终止液未及时加入，影响显色强度与读数准确性。
加样错误（漏加、错加、气泡）或加样后等待入孵时间过长，尤其在高温环境下易蒸发。