如何判断ELISA试剂盒的回收率是否合格？

通过加标实验验证ELISA试剂盒的回收率是评估其准确性的核心方法，具体操作和判断标准如下：
一、加标实验操作步骤
‌样本准备‌
选择不含待测物的基质液（如空白血清）作为基础样本，避免背景干扰‌。
将已知浓度的标准品（如褪黑素）按梯度加入样本中，加标量建议覆盖目标物浓度的50%-150%‌。例如，若样本中目标物含量为50 ng/mL，可设置25 ng/mL、50 ng/mL、75 ng/mL三个加标水平‌。
‌检测与计算‌
使用ELISA试剂盒分别检测加标样本和未加标的原始样本，每个加标水平需设置≥3个平行样以减少误差‌。

‌回收率计算公式‌：
回收率(%)=加标样本测定值均值−原始样本测定值均值
加标量×100%回收率(%)= 加标量
加标样本测定值均值−原始样本测定值均值×100%
例如，若加标10 pg/mL的样本测得9.2 pg/mL，则回收率为92%‌。
二、合格标准与结果判断
‌合格范围‌：平均回收率应在80%-120%之间，表明检测过程准确且无基质干扰‌。
‌精密度要求‌：板内变异系数（CV）应<5%，板间CV需<10%‌。若回收率超出范围或CV超标，需排查试剂活性、操作规范或样本基质问题。
三、注意事项
‌加标物质选择‌：需与待测物化学性质及免疫反应性相似，纯度应≥95%‌。
‌实验顺序‌：建议先完成稀释线性验证，再执行加标回收实验。
‌温度控制‌：试剂需平衡至室温（20-25℃），避免温度不均导致偏差‌。
通过以上步骤和标准，可系统评估ELISA试剂盒的回收率是否合格，确保实验数据的可靠性。