小鼠免疫球蛋白 G（IgG）定量检测试剂盒技术之旅

一、试剂盒亮点聚焦
1.精准检测的核心优势
本试剂盒在精准度方面表现卓越，校准品剂量反应曲线相关系数 r 值≥0.9900，这一高标准确保了标准曲线的高度拟合性，为您的实验结果提供了坚实的准确性基础。无论是研究疾病机制、药物研发还是免疫学探索，精准的数据都是构建科学结论的基石。同时，批内变异系数 CV%＜10%，批间变异系数 CV%＜15%，保证了在不同实验条件和批次下，您都能获得稳定一致的检测结果，极大地提高了实验的重复性和可靠性。
‌2.高灵敏度信号放大系统‌
通过优化酶标抗体和显色底物（如TMB），使检测灵敏度达1.24ng/mL，板内变异系数<10%，适用于血清、血浆及细胞上清样本。
性能优势与科研应用
‌精准定量‌：校准曲线相关系数r≥0.9900，回收率85%-115%，确保数据可靠性‌。
‌亚型兼容性‌：可同时检测IgG1/IgG2a/IgG2b/IgG3等亚型，支持疫苗研发和免疫机制研究‌。
‌临床转化‌：用于监测疫苗接种效果及自身免疫疾病标志物分析‌。
操作优化与稳定性
‌简化流程‌：液体双试剂设计减少手工操作步骤，2-8℃保存有效期6个月‌。
‌智能平台‌：一体化系统整合样本处理、孵育及数据分析，降低人为误差‌。
3.出色的回收率与稳定性
回收率在 85% - 115% 之间，这意味着在样本处理和检测过程中，IgG 的损失或增加都被控制在合理范围内，使您的实验数据更加可信。稳定性方面，试剂盒在 2℃ - 8℃保存条件下，有效期长达 6 个月，为您的实验安排提供了充足的时间窗口。无论是长期跟踪研究还是短期实验项目，它都能始终如一地保持良好的性能状态。

二、试剂盒组成与保存指南
丰富且关键的组分
试剂盒内包含了一系列精心配制的组分，共同协作完成检测任务。校准品为实验提供了精确的浓度参照标准，其浓度依次为 100、50、25、12.5、6.25、3.125ng/mL，如同实验中的 “度量衡”，帮助您构建准确的标准曲线。包被微孔板预包被了固相抗体，是特异性结合反应的关键场所。HRP 标记抗体作为检测的 “信号放大器”，能够特异性识别并标记目标 IgG 分子。样本稀释液、底物液 A、底物液 B、终止液和 20× 浓缩洗涤液等，各自在实验过程中发挥着不可或缺的作用。此外，还配备了详细的说明书，为您的实验操作提供全面的指导；自封袋方便试剂的保存和取用；不干胶则有助于您对实验试剂和样本进行清晰标记。
严格的保存要求
未开封的试剂盒必须保存在 2 - 8℃的低温环境中，以维持试剂的活性和稳定性。开封后的各组分也有明确的储存条件和期限。例如，校准品和包被微孔板开封后在 2 - 8℃可保存 14 天，HRP 标记抗体、样本稀释液、底物液 A、B、终止液和 20× 浓缩洗涤液在 2 - 8℃可保存 180 天。严格遵循保存要求，是确保试剂盒在有效期内保持最佳性能的关键，能够保障您每次使用都能获得可靠的检测结果。
三、操作流程详细解析
1.实验准备阶段
在开始实验前，需确保所有的试剂和组分都至少复温 120 分钟，使其充分达到室温（20 - 25℃），这一步骤对于保证实验反应的准确性至关重要。对于从冰箱取出的浓缩洗涤液，可能会出现结晶现象，这属于正常情况，只需将其进行水浴加热，使结晶完全溶解即可。然后按照 1:20 的比例将浓缩洗涤液与蒸馏水稀释，制备成工作洗涤液备用。底物液 A 和 B 在使用前需按 1:1 体积充分混合，且混合后应在 15 分钟内使用，以确保底物的活性和反应效果。
2.样本与标准品处理
根据实验需求，采集合适的样本，如血清、血浆、细胞培养上清液等，并按照试剂盒提供的样本采集和保存指南进行处理。在加样过程中，设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，标准品孔加入不同浓度的校准品 50μL，0 值孔加入样本稀释液 50μL，空白孔不加任何液体，样本孔加入待测样本 50μL。所有样本和标准品建议进行复孔操作，以提高实验的准确性和可靠性。
3.酶联免疫反应过程
除空白孔外，在标准品孔、0 值孔和样本孔中加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，然后用封板膜盖住反应板，将其置于 37℃水浴锅或恒温箱中温育 60 分钟。在温育过程中，需确保反应环境的温度稳定，以促进抗原 - 抗体的充分结合。温育结束后，小心揭开封板膜，弃去孔内液体，将反应板倒扣在吸水纸上轻轻拍干，注意避免液体残留和交叉污染。
4.洗板操作要点
洗板是实验中至关重要的步骤，直接影响实验结果的准确性。每孔加满洗涤液（使用前确保洗涤液已稀释至工作浓度），静置 20 秒，然后甩去洗涤液，再次将反应板倒扣在吸水纸上拍干。如此重复洗涤 5 次，确保彻底去除未结合的物质。若使用自动洗板机，需按照洗板机的操作程序进行操作，并可添加浸泡 30 秒的程序，以提高洗板效果，进一步降低背景干扰，提高检测的灵敏度和特异性。洗板结束后，在加入底物前，要在干净不掉屑的纸上充分拍干反应板，确保孔内无残留液体。
5.显色与终止反应
将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合后，迅速向所有孔中加入 100μL 底物混合液，用封板膜盖住反应板，再次将其放入 37℃水浴锅或恒温箱中温育 15 分钟。在显色过程中，要注意避免强光直接照射反应板，以防止底物过早氧化影响显色效果。显色反应结束后，每孔加入 50μL 终止液终止反应，终止液的加入应迅速且均匀，确保反应在同一时间停止。
6.结果测定与计算
在加入终止液后的 15 分钟内，使用标准规格酶标仪在 450nm 波长下读取各孔吸光度（OD 值）。读取 OD 值时，需确保酶标仪的波长设置准确，光密度范围在 0 - 3.5 之间，并建议提前 15 分钟预热酶标仪，以保证仪器的稳定性和检测准确性。以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度（OD 值）为纵坐标，利用专业的计算机软件（如 ELISA Calc 软件）进行四参数 Logistic 曲线拟合，创建标准曲线方程。通过样本的吸光度（OD 值）代入方程，计算出样品的浓度值。若样品在检测前进行了稀释，需将计算得到的浓度值乘以稀释倍数，才是样品的最终真实浓度。