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315 人阅读发布时间:2024-08-22 11:41
快速PCR技术与快速PCR仪,两者虽紧密相连,实则蕴含深刻差异,恰如并蒂莲之双生,形态相近而神韵各异。
首先,从时间效率的维度审视,快速PCR技术并非单纯依赖快速PCR仪的硬件加速,而是将一系列精妙策略融于一炉。它不仅囊括了仪器升降温的迅猛,更在于超薄反应管的应用、DNA聚合酶的高效催化,以及反应体系内温度的微妙平衡,共同编织成一幅时间缩短的壮丽图景。反观快速PCR仪,其虽能标榜高速升降温,但若无技术配套,犹如孤掌难鸣,难以独撑快速PCR技术之大厦。
再者,从技术实现的层面剖析,快速PCR技术犹如一位高超的舞者,在基因扩增的舞台上轻盈跳跃,每一步都精准无误。它要求PCR仪不仅具备卓越的温控能力,还需与超薄管、高速酶等完美配合,方能实现真正的“快速”。而快速PCR仪,更像是这位舞者的舞台,虽光华四射,但若无舞者精湛技艺,亦难呈现出令人瞩目的表演。
综上所述,快速PCR技术与快速PCR仪之区别,犹如星辰与夜空,相互依存而又各自闪耀。技术是星辰,以其独特的光芒引领方向;仪器是夜空,以其广阔的胸怀承载梦想。两者相辅相成,共同推动了PCR领域的发展与进步。
下面就以上几点做一点分析,以便大家了解快速PCR技术与快速PCR仪的区别。
1、模块升温和降温度时间
PCR仪一般会标明升温速度和降温速度,但标的大多是最大变温速度,也就是说是瞬间达到的速度。而与实验相关的平均升降温速度只有极少量厂家标明。以平均2度和4度(能做到平均升降温4度的仪器极少)来计算,从95度降到55度,分别是20秒和10秒,每一个循环差20秒钟。以一般35个循环来计算,影响实验时间700秒,也就是不到12分钟。实际还要考虑过冲问题,影响时间还会少些。
2、模块与PCR管内温度平衡时间
模块温度达到后,PCR管内的温度远没有达到(塑料和水的导热系数比铝块差300倍以上),需要时间来使二者达到平衡。一般有四种办法来减少这一时间,一是让模块温度过冲,在管内温度快达到时降到目标温度,但太高的过冲可能造成实际温度过冲,影响PCR反应结果;二是减少PCR反应液的体积,但体积变小时PCR反应的可靠性会降低;三是降低PCR管的厚度,但太薄时强度不够;四是增加PCR管与模块贴附程度。
3、延伸时间
延伸时间与PCR产物的长度和DNA聚合酶的合成速度有关。如果PCR产物长度少于100bp时,可能考虑将延伸时间变为0(即两步法);采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法,但并不是所有PCR实验都可以用高速的DNA聚合酶。
4、循环次数
循环次数与模板量及检测要求相关。
所谓快速PCR技术是将快速PCR仪与超薄管(或特殊贴附技术)以及高速DNA聚合酶等技术整合在一起,可达到较短时间完成PCR反应。而一些厂家在向用户推销PCR仪时,不去说明快速PCR技术,只强调PCR仪速度快(大都用最大升降温速度来HuYou用户)。好像买了快速PCR仪后,原来1个半小时的扩增时间变会缩短成半小时似的。而用户采购了快速PCR仪后才发现并不那么回事。有不少用户采用快速模式根本就做不出好的实验结果。特别是进行多重PCR扩增的用户,如公安系统用于身份鉴定的试剂。
快速PCR技术与快速PCR仪是两回事。快速PCR仪最多只能缩短PCR反应时间10分钟左右,要实现真正的快速PCR反应,还需要其他一些努力。大多数用户根本就不需要快速PCR技术。