HRCEpiC细胞人肾皮质上皮细胞细胞培养操作过程

HRCEpiC细胞人肾皮质上皮细胞细胞培养操作过程：

注意无菌。无论哪一管液体，开盖后尽量立即关上（如果有几瓶都需要开的，也注意，可以虚盖）。盖子向上放。操作时不要从开盖的容器上方经过。另外，无菌台面上摆放的各种东西，*是一字摆开，平行于自己。尽量不要前后重叠。

HRCEpiC细胞人肾皮质上皮细胞细胞操作中所用的所有耗材试剂*都是细胞培养。一般都以一次性耗材居多。1ML枪头为加长型培养枪头。移液管亦有10mL一次性无菌移液管

（1）细胞换液：

培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液，加入新培养液。

（2）细胞传代：

传代之前先观察，细胞是否密集，是否开始融合。一般融合达到70－80%就可以传代。早点传代也可以。

如果是贴壁生长的细胞：

1） 培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液；

2） 无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次（按培养体积加入）；

3） 加入适量胰酶消化适当时间（一般胰酶为0.25%；9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑，一般如果是细胞株，非原代培养，消化1－2分钟足矣）；

4） 用枪头吹打数十次（视细胞类型而定。一般细胞株30－50次吧，耗时一般2分钟左右）；

5） 加入适量体积完全培养基终止胰酶消化（如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，可以加入1mL完全培养基；现在培养瓶（皿）里有2mL溶液）。

6） 现在可以将溶液进行分瓶（2mL）。如果是细胞株，直接均分到两个培养瓶（皿）里。如果是原代培养，可以根据消化时间来对细胞进行分离；因此可以将溶液（2mL）都转入新的培养瓶（皿）。

7） 将两个培养瓶（皿）补足完全培养基到正常体积（果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，为5mL完全培养液）

8） 镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁，悬浮在溶液中，呈圆形。一般2h之内会贴壁，如果已经贴壁，根据细胞类型有不同的形态，但通常都不是圆形。

9） 镜下观察无误之后，再放入细胞培养箱。培养瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。

10） 传代之后，*第二天细胞换液一次。当然，也可以视情况而定。

7、 收拾工作台。物品归位，倒出垃圾。再开紫外照射30min3小时。或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。