阿马帕里病毒RT-PCR试剂盒样品RNA的制备

阿马帕里病毒RT-PCR试剂盒样品RNA的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阿马帕里病毒PCR阳性对照的10000倍稀释的（稀释后浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于1万拷贝，可以将10μL原液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为10000倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。

【设置 RT-PCR 反应（20μL 体系】

3. 如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳性对照，另一个是RT-PCR阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
phospho-ATM (Ser794)    磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体
ATP5E    ATP5E蛋白抗体
ATP5G2    ATP5G2蛋白抗体
ATP6V0D2    ATP6V0D2蛋白抗体
ATP6V1B2    ATP6V1B2蛋白抗体
ATPIF1    ATPIF1蛋白抗体
Attractin    Attractin蛋白抗体
Phospho-Aurora B(Tyr12)    磷酸化有丝分裂激酶B抗体
ARPM1    肌动蛋白相关蛋白M1抗体
ABH1    ALKB蛋白抗体
ACAA1    乙酰辅酶A酰基转移酶1抗体
phospho-beta Actin (Tyr53)    磷酸化β-肌动蛋白抗体
APOD    载脂蛋白D抗体
ASIC1/BNaC2/ASIC1A    酸敏感离子通道1抗体
ADAR1 (C-terminus)    双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（C端）
AF10    髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗体
ADCY1    腺苷酸环化酶1抗体
APC    腺瘤样息肉抗体
AGPAT1    溶血磷脂酰基转移酶抗体
ANKS3    锚蛋白重复及SAM结构域蛋白3抗体
phospho-ALK (Tyr1586)    磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体
ACADVL    酰基辅酶A脱氢酶很长链抗体
AMSH    信号转导衔接结合蛋白抗体