探讨以血管内皮生长因子(VEGF)抗体为导向,白喉毒素突变体(CRM9)作效应部分

  探讨以血管内皮生长因子(VEGF)抗体为导向,白喉毒素突变体(CRM9)作效应部分,构建靶向毒素VEGF抗体-CRM9,为直接杀伤肿瘤细胞寻找新的药物.
           
方法 应用异型双功能连接剂甲基丙烯酸甲酯丁二烯苯yi烯三元共聚物(MBS)连接兔抗人VEGF多抗和CRM9,制备成新的构建蛋白,Sephacryl S-300分离纯化后,经聚bing烯酰胺凝胶电泳证明二者的结合情况.对构建蛋白抗体活性采用酶联免疫法检测,生物毒性应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测.结果 构建蛋白通过分离并电泳后,出现明显增粗的分子量为116 000新条带,位于CRM9和VEGF条带前方.构建的蛋白结合体中抗体活性检测,VEGF抗体与CRM9按1:1制备的蛋白结合体,抗体活性与VEGF抗体对照差异无统计学意义(P>0.05),按1:5和1:8两种比例制备的蛋白结合体,抗体活性降低与VEGF抗体对照差异有统计学意义(P<0.01).构建的蛋白结合体中CRM9毒性检测,VEGF与CRM9按1:1比例制备蛋白结合体杀伤效果与空白对照组差异有统计学意义(P<0.01),与CRM9组差异无统计学意义(P>0.05),CRM9组杀伤效果与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 MBS能将VEGF抗体与CRM9连接构建成新的蛋白结合体,结合体中CRM9生物毒性和VEGF抗体活性不变.这将为进一步的免疫毒素抗肿瘤的各项研究奠定了基础.
人胚肾细胞；293 [HEK-293]
人包皮成纤维细胞；HFF
人胚肺成纤维细胞；MRC-5
人皮肤成纤维细胞；CCC-HSF-1
人羊膜细胞；WISH
人胚肺成纤维细胞；CCC-HPF-1
人胚皮肤成纤维细胞；CCC-ESF-1
人胚胎眼巩膜成纤维细胞；HFSF
人胚胎眼Tenon＇s囊成纤维细胞；HFTF
人肾皮质近曲小管上皮细胞；HK-2
人肾小管上皮细胞；HKC
人胚胎膀胱组织来源细胞；CCC-HB-2
人胚胎气管组织来源细胞；CCC-HBE-2
人胚肾二倍体细胞；CCC-HEK-1
人胚肝二倍体细胞；CCC-HEL-1
人胚胎心肌组织来源细胞；CCC-HEH-2
人胚胎肠粘膜组织来源细胞；CCC-HIE-2
人胚胎胰腺组织来源细胞；CCC-HPE-2
人胚胎肌肉组织来源细胞；CCC-HSM-2
人葡萄膜黑色素细胞；UM
人胚肺成纤维细胞；WI-38 [WI38]
SV40T转化的人胚肾细胞（亚系）；293T/17
293来源病毒包装细胞；ΦA
293来源病毒包装细胞；ΦA-GP
人永生化表皮细胞；HaCaT
SV-40转化肺成纤维细胞；WI38/VA13
人乳腺上皮细胞；MCF-10A
人胚肺成纤维细胞；MRC-5
人胚肺二倍体细胞；2BS
人胚肺二倍体细胞；KMB-17
人胚肾细胞；293 [HEK-293]
人脐静脉内皮细胞；HUV-EC