细胞培养中由血清引起的细胞生长状态不佳及病毒滴度的影响表现哪几个方面

3633 人阅读发布时间：2022-03-31 11:30

现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以 CHO 细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。细胞培养的发展，培养基的质量是关键，而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。血清是一种成分复杂的混合物，不同批次血清对细胞生长的促进作用不同。大规模细胞培养中由血清引起的细胞生长状态不佳及病毒滴度的影响表现在以下几个方面:

1、细胞生长速度缓慢,长满单层时间长；从同一细胞瓶中分出两瓶细胞，用同一种培养液，分别加入 10% 的对照血清和待检血清，在相同条件下培养 72 小时，会出现对照血清长满单层，而待检血清大约只有 60~70%，这种血清就不适合用来大规模培养细胞。

2、细胞传代后形态不正常,细胞状态发生变化;由于血清的质量问题，使原本状态正常的细胞经传代后形态会变差；比如:细胞瓶里会出现一些蠕动的小黑点(并非污染)，或者细胞表面形成一层油状覆盖物；细胞的轮廓变得模糊，细胞之间的间隙被血清中的蛋白颗粒填充，从而影响细胞向四周扩展生长。

3、细胞传几代后就出现脱璧现象,不能连续传代；质量较差的血清缺乏某种细胞的贴壁因子，会使细胞在传代过程中逐渐丧失贴壁的能力。细胞会从正常的贴壁状态，边缘开始萎缩，上翘。观察到的现象就是细胞表面不光滑，晃动细胞瓶会看到细胞表面有絮状物随培养液波动。随着传代次数增加，细胞萎缩的情况越来越严重，直到最终完全脱壁而死亡。

4、细胞长的很好，致密的单层，状态也很正常，但是接毒后细胞基本不发生病变，做滴度检测几乎测不出抗原滴度这种情况也许是因为血清中含有与接种的病毒有同源的特异性抗体。比如血清中经常会存在乙脑抗体，牛腹泻病毒抗体等，如果存在这些抗体，就会把接进去的病毒给中和掉。如果抗体滴度很高，病毒会被抗体完全中和，就没有病毒颗粒在细胞中增殖，所以会检测不到病毒滴度。这种情况给疫苗企业造成的损失是相当大的，不产毒等于前面所做的那么多工作全部白费，浪费人力、物力，尤其是时间上的浪费，从培养细胞开始到接病毒，到收液至少需要一两个月，一旦出现不产毒的情况，那么这一两月时间就白白浪费掉了，这也是牛血清给疫苗企业造成的风险之一。

5、细胞生长的状态一般，产毒少，毒价低这种情况比较常见，细胞是病毒的载体，由于血清质量不好，导致细胞生长状态不好，病毒就无法进行正常的复制。并非所有病毒都不能复制，所以就造成疫苗的效价不够，可能造成不合格产品。

牛血清的作用：

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。
4.在细胞培养试验中是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

注意事项：
1. 储存和解冻血清时先置于 2～8℃ 冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。
2、除去血清中的含絮状沉淀，离心血清（400g，1-2 分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至 37℃ 就会再溶解。
3、一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
储存条件：
血清一般储存于 -20℃，同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后，首先要灭活处理，然后分装成小包装，储存于 -20℃，使用前融化。融化时最好现置于 4℃。融化后的血清在 4℃ 不宜长时间存放，应尽快使用。

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