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转基因植物PAT基因PCR检测试剂盒说明书
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转基因植物Sad1基因核酸检测试剂盒反应五要素

452 人阅读发布时间:2021-01-19 13:42

转基因植物Sad1基因核酸检测试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
人生长激素释放多肽(GHRP)ELISA检测试剂盒
人生长激素结合蛋白(GHBP)ELISA检测试剂盒
人生长激素(GH)ELISA检测试剂盒
人生长分化因子-9(GDF-9)ELISA检测试剂盒
人生长分化因子3(GDF3/UNQ222/PRO248)ELISA检测试剂盒
人生长分化因子2(GDF2)ELISA检测试剂盒
人生长分化因子15(GDF15)ELISA检测试剂盒
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人肾小球组织糖基化终末产物(GTE-AGE)ELISA检测试剂盒
人肾损伤分子1(Kim-1)ELISA检测试剂盒
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人肾素(Renin)ELISA检测试剂盒
人肾上腺髓质素前体(Pro-ADM)ELISA检测试剂盒
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人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)ELISA检测试剂盒
人神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA检测试剂盒
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人神经丝蛋白M(NF-M)ELISA检测试剂盒
人神经丝蛋白L(NF-L)ELISA检测试剂盒
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人神经生长因子受体(NGFR)ELISA检测试剂盒
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