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海量 PCR 片段纯化试剂盒实验步骤

人阅读 发布时间:2020-11-19 13:11

海量 PCR 片段纯化试剂盒实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65て水浴中预热高心管中加入ME(基乙醇),(10mL加80u,50mL中加入300u)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空神即可!国体培养就更好说了)在液氮中迅速磨成精细粉末装入50mL离心按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颜到混匀
(3)65C水浴3-10min,期间混匀2-3次
(4)力ロ入等体积的(注意是酸動pH4.5)氯fang:异成醇(2524:1)油提(10,00opm,4C,5min)
(5)取上清等体积的lv仿异戌醇(24:1)油提(10,D00rpm,4C,5mn)
(6)カロ入14V体积10MLiC溶液,4C放置6h以上(或过
(7)10,000rpm,4C离心20min
(8)上清,用500 UI SSTE溶解沉淀
(9)酚氯lv仿异成醇(25241抽提两次氯fang异成醇(24:1)油提1次(10,00rpm.4C,5min)
(10)加2体积的无水乙醇在-70て冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4C高心20mn
(12)弃上清沉淀用70%酒精漂洗一次干漫
(13)カ200u的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼開糖疑胶电泳和蒙外分光光度计扫描检测RNA的质量在神提过程中,若蛋白质含量或其它的质还较多,可以加抽提次数)。
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