检测斑疹伤寒病原体实时荧光定量PCR方法的建立

     斑疹伤寒病原体包括普氏立克次体和莫氏立克次体,本研究采用实时荧光定量PCR TaqMan MGB探针技术,根据两者的外膜蛋白B基因序列(ompB)分别设计一对种特异性引物与一个种特异性探针,建立了检测斑疹伤寒病原体--普氏立克次体和莫氏立克次体的两种实时荧光定量PCR。检测斑疹伤寒病原体实时荧光定量PCR方法的建立黑龙江立克次体和立克次体精河株毒力和抗原性初步研究

    第一部分检测斑疹伤寒病原体的实时荧光定量PCR方法建立 斑疹伤寒病原体包括普氏立克次体和莫氏立克次体，本研究采用实时荧光定量PCR TaqMan MGB探针技术，根据两者的外膜蛋白B基因序列(ompB)分别设计一对种特异性引物与一个种特异性探针，建立了检测斑疹伤寒病原体——普氏立克次体、莫氏立克次体的两种实时荧光定量PCR。 用这两种荧光定量PCR分别检测两种斑疹伤寒病原体的标准目的DNA，最低检出量小于10个拷贝，检出灵敏度约为普通PCR的1000倍；用两种方法分别检测其它立克次体和相关的病原菌DNA样本，检出结果均为阴性。 用这两种定量PCR方法分别检测普氏立克次体和莫氏立克次体感染豚鼠血样本，从感染第3天到第18天的大部分血样本检测为阳性，而用相应的普通PCR检测血样本，结果均为阴性。用一种定量PCR方法检测另一种定量PCR方法检出的阳性样本，检测结果均为阴性。 本研究建立的检测两种斑疹伤寒病原体的实时荧光定量PCR方法具有高度种特异性和敏感性，适合于快速检测斑疹伤寒感染早期血样本中微量立克次体DNA，快速确诊流行性斑疹伤寒和地方性斑疹伤寒。 第二部分黑龙江立克次体和立克次体精河株的毒力与抗原性初步研究 斑点热(spotted fever)是由斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsiae，SFGR)所引起的一组疾病的总称。