肝纤维化技术特征摘要

        近年来，肝纤维化的临床治疗取得一些新进展，但是目前仅有中国批准上市两种 中药复方，除针对病因治疗以外，尚无其他治疗药物。在药物筛选模型方面，抗丙型肝炎病 毒（HCV)药物筛选系统研究较为成熟，用于筛选抗肝脏脂肪变性及磷脂质病已有细胞模型建立，除此之外，尚未见其他抗肝纤维化药物筛选模型的报道，且所述两种模型分别针对 HCV及脂肪病变，并不适合所有抗肝纤维化药物的筛选。因此，建立新的药物筛选模型，寻找 临床有效的抗肝纤维化药物，已成新药研发的当务之急。 胶原的过度表达是肝纤维化产生的基本特征，同时也是造成器官器质性病变的 重要原因，其中I型胶原α 1在纤维化过程中发挥十分重要的作用。此外，在肝纤维化过 程中，I型胶原α 1的高表达主要是在转录水平。近年来，本实验室以I型胶原α 1基因 C0L1A1启动子活性为靶标，筛选研究了潜在抗肝纤维化的药物。

      肝纤维化是肝脏内的细胞外基质，特别是I型胶原d 1过度沉积的病理过程。它 是机体对急、慢性肝损伤的一种修复反应，大部分慢性肝病都伴随肝纤维化。肝纤维化继续 发展最终会导致肝硬化，而肝硬化在全球的发病率和死亡率中占很大比例，最终只能依靠 肝移植来延续生命。研究表明，肝纤维化是可以逆转的，因此研究如何控制肝纤维化这一可 逆的病理过程，对于肝纤维化及肝硬化的治疗具有十分重要的意义。 首先，利用基因重组...

【技术保护点】
一种抗肝纤维化药物高通量细胞筛选模型，其特征是，所述模型由Ⅰ型胶原α1基因启动子序列COL1A1P、携带荧光素酶报告基因pGL4.17载体构建的重组质粒pGL4.17‑COL1A1P、稳定表达COL1A1启动子的单克隆细胞株LX2‑COL、抗性筛选试剂G418、作为LX2活化诱导剂的致肝纤维化细胞因子TGF‑β1以及荧光素酶报告基因检测系统构成。

【技术特征摘要】
1. 一种抗肝纤维化药物高通量细胞筛选模型，其特征是，所述模型由I型胶原 α 1基因启动子序列C0L1A1P、携带荧光素酶报告基因 pGL4. 17载体构建的重组质粒 pGL4. 17-C0L1A1P、稳定表达C0L1A1启动子的单克隆细胞株LX2-C0L、抗性筛选试剂G418、 作为LX2活化诱导剂的致肝纤维化细胞因子TGF-β 1以及荧光素酶报告基因检测系统构 成。2. 权利要求1所述的筛选模型，其特征是，所述重组质粒pGL4. 17-C0L1A1P是利用I型 胶原α 1基因 C0L1A1序列设计引物，经PCR获得I型胶原α 1基因启动子序列C0L1A1P，将 其与pGL4. 17载体经Sac I和Bgl II双酶切后连接、转化、提取质粒DNA得到。3. 权利要...