细胞的计数原理及注意事项

【概述】
      细胞计数法是细胞培养研究中的一项基本技术，它是了解培养细胞生长状态，测定培养基、血清、药物等物质生物学作用的重要手段。常用的细胞技术有血球计数板计数法和电子细胞计数仪计数法。
【用品】
血球计数板、吸管、胰酶、培养液、显微镜
【步骤】

准备计数板：用无水乙醇或95%乙醇清洁计数板和盖玻片，待干燥后，把盖玻片覆在计数板上面，使之微微移向一侧，露出计数板台面少许；
用移液枪在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，加样时不要溢出盖玻片也不能溢入两侧的玻璃槽内，如果产生上述情况需对计数板冲洗和拭干后重新加样，加样量也不要过少或带气泡；
在显微镜下，用10×物镜观察，可见细胞均匀分散计数板各处。计算四角大方格内的细胞数，压中线者只计算左线和上线者，右线和下线不计算在内(即仅计算压两个边的细胞)，成团细胞按单个细胞计算。按照下面公式计算细胞密度：
(细胞悬液的细胞数)/ml＝(四个大格子细胞数/4) ×稀释倍数×104
【注意事项】

消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单细胞悬液。否则会影响细胞计数结果。
取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时，尤其要注意这一点。否则，前后计数结果会有很大的误差。
镜下计数时，遇见2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如细胞团10%以上，说明消化不充分；或细胞数少于2个/mm2或多于50个/mm2时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液、计数。