神经细胞成功培养的秘诀

     Lloyd-Burton大约一半的客户会培养细胞两周左右，这对许多生化、分子生物学或早期发育研究而言已经很好。但是，“如果你想要了解成熟的神经元，就好像研究成人的大脑一样，你真的需要在体外培养至少三周，”她说。“此时，你能看到培养物有许多突触，如果你研究电生理学，你还会看到它们在互相交谈——那里有许多自发的动作电位。”

     神经元是终末分化的非增殖细胞，但它们会变大。Kaur称，人们通常在适当的基质上铺板，多聚赖氨酸是最常用的，但为了增加更长期培养的强度，许多研究人员也会添加细胞外基质成分，如层粘连蛋白。细胞的接种密度应考虑到分析。“对于电生理学，你肯定不希望细胞过于拥挤，但如果是收集细胞进行蛋白表达分析，你需要90%的汇合度，”她说。

      如今，研究人员通常利用Life Technologies（赛默飞世尔旗下）的Neurobasal® 培养基来培养神经元，而胶质细胞提供了必要的生长因子。不过，有些研究人员也以条件培养基来取代胶质细胞。B-27® 是他们通常使用的添加剂，它也有不同的版本，比如不含抗氧化剂，或不含胰岛素。

    各大培养基供应商也生产他们自己的Neurobasal和B-27。Lloyd-Burton表示，这些产品的名称可能不同，但都是基于相同的配方。不过她也指出，原料的来源可能不同，并在不同的浓度下使用，导致不同厂商甚至不同批次间的差异。因此，用户最好亲自检测。

     为了让细胞开心，Kaur建议每三天更换一半培养基，并加入新鲜的培养基。Krantis也指出，维持培养的渗透压对成功的长期培养很关键，需要尽量减少蒸发，并补充损失的水分。

     据Lloyd-Burton介绍，绝大多数培养神经元的实验室是从啮齿动物上获得神经元。其他人，如Henley，则利用斑马鱼和青蛙进行短期研究，这相对容易，且设备成本低。无论你选择哪个物种，条件和分析，请放轻松，这并不是在做一台脑科手术。
0