分享细胞与毒株的驯化与保藏

为提高生物制品的产率和安伞有效性，在生物反应器中繁殖的病毒与细胞需要进行相互适应选择，针对不同的毒株及其表达量筛选适合的宿主细胞对于细胞大规模生产具有重要意义。

细胞的筛选驯化和保藏

实现悬浮培养首先需要选择合适的宿主细胞，细胞系的特征直接影响放大的可能性以及放大技术的选择。同一种细胞在悬浮培养和贴罐培养时对同一病毒的敏感性不同；同一株细胞不同的克隆对营养条件有不同的需求，对病毒敏感性亦可能不同。

常根据毒株特性，综合考虑所用毒株能在何种细胞上增殖、表达，悬浮或贴壁细胞属性足否适合大规模培养，规模和技术是否影响表达的稳定性，能否进行驯化，驯化后毒株的敏感性和表达量是否有变化等因素选择合适的宿主细胞。

细胞筛选驯化的实质是应用现代细胞生物学技术，在降低细胞凋亡率、提高细胞活力、延长细胞生命周期、提高产物浓度等方面进行研究，结合特定细胞的营养需求进行培养基优化，筛选适用于生产的细胞株。

为实现驯化的稳定，通常由高密度细胞培养转向低密度细胞培养，由高浓度血清培养逐渐降低血清浓度进行培养。因细胞损伤后难以修复，所以驯化时细胞活力应保持在90%以上。细胞的增殖能力直接影响产能，驯化时应保持对其增殖能力的测定。细胞驯化时还应对其表达分泌能力进行测定，避免驯化后的细胞表达特性发生变化。驯化后细胞的增殖能力、活力及生产能力要能够满足工业大规模生产的需要。

由于特定细胞的营养需求不同，实现其驯化的难易程度也不同，在驯化时需要选用合适的细胞培养基，有针对性地补充某些营养成分以满足细胞的特定需求，使驯化好的细胞可以保持其悬浮或是无血清生长的特性。与20世纪80年代相比，由于细胞培养基技术的发展，细胞驯化变得相对容易。

在筛选驯化过程中应注意及时对细胞进行保藏，以避免在培养过程中出现异常情况导致筛选驯化工作量的重复和时间浪费。保藏时，应选用在该驯化条件下细胞状态良好的细胞。

250克    Anaerobic Broth    用于专性厌氧菌培养    GAM肉汤
250    Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar    用于致病性弧菌的选择性分离（GB、SN标准）    TCBS琼脂    
250    EEM medium    用于致病性大肠杆菌的增菌培养和肠杆菌的增菌培养(Japan方法)    EEM培养基
250克    Dextrose Semisolid Medium    用于志贺氏菌的生化试验    葡萄糖半固体发酵管
250    Ammonium Dextrose Medium    用于志贺氏菌的葡萄糖铵试验（GB标准）    葡萄糖铵培养基  
250    Dextrose Semisolid Medium    用于志贺氏菌的复合生化试验（GB标准）    葡萄糖半固体培养基   
250克    MS Medium    用于植物组织培养的基础培养基    MS培养基
250克    NLN Medium    用于植物组织培养    NLN培养基