激素调控植物干细胞实验方法的介绍

植物也有干细胞，而且和动物干细胞一样，在一定条件下可以分化成多种功能细胞，是高等生物生长发育的细胞来源。近日，山东农业大学教授张宪省带领的研究团队就在植物干细胞领域研究取得重大突破，揭示了激素调控植物干细胞活动的分子机理。6 月 2 日，国际植物学领域顶级学术期刊《植物细胞》以《B 类细胞分裂素响应因子通过对 WUSCHEL 基因的双重调控作用决定干细胞的活动》为题发表了这项研究成果。该成果对推动植物离体快繁和基因工程奠定了重要的理论基础，这也标志着我国在该领域的研究达到了国际领先水平。

植物干细胞主要存在于茎端、根端和形成层。茎端干细胞通过不断分裂与分化形成植物的地上部分；根端干细胞形成植物的地下部分。早在 1957 年，科学家就发现外源细胞分裂素和生长素能够诱导干细胞再生，但 60 年来科学家都不清楚其作用机制，因此大多数农作物、林木和花卉难以建立离体再生系统，也无法进行离体繁殖和基因工程操作。

在多年的研究中，张宪省团队采用细胞生物学、遗传学、生物化学等方面的研究手段，证明细胞分裂素响应调节因子 ARRs 对干细胞决定基因 WUSCHEL 有直接调控作用。他们发现，在离体培养过程中，细胞分裂素信号转导通路中的 B 类响应因子一方面直接启动 WUSCHEL 基因的转录，另一方面通过抑制生长素合成基因的表达，间接促进和维持了 WUSCHEL 基因的表达，从而使愈伤组织细胞发生命运转变，形成茎端干细胞，进而形成完整植株。他们还发现，B 类细胞分裂素响应因子对 WUSCHEL 基因的双重调控作用不仅发生在离体培养的组织中，在正常生长的植物体内也具有调节干细胞活动的功能。

大鼠26S蛋白酶体(26S PSM)      荧光素PE标记CD34（细胞表面的唾液粘蛋白）IgG    
大鼠5核苷酸酶(5-NT)     荧光素Cy5标记P27/周期素依赖激酶抑制剂IgG    
大鼠5羟色胺(5-HT)     荧光素Cy5.5标记神经细胞粘附分子1IgG    
大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)     荧光素Cy5.5标记抗T淋巴细胞CD1IgG    
大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)     荧光素Cy5.5标记CD83IgG    
大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)      荧光素Cy3标记转移生长因子–β受体2IgG    
大鼠8异前列腺素(8-iso-PG)     荧光素Cy3标记微管相关蛋白IgG    
大鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)     荧光素PE标记P物质受体IgG    
大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)      荧光素PE标记Jagged1/CD339IgG    
大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)     荧光素PE标记HER3受体IgG