ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面：

1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。

2、研究抗酶抗体的合成。

3、显现微量的免疫沉淀反应。

4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

 组成 :

试剂盒组成      48孔配置            96孔配置            保存

说明书             1份                1份  

封板膜          2片（48）          2片（96）   

密封袋             1个                1个  

酶标包被板        1×48             1×96            2-8℃保存

标准品          0.3ml×6瓶         0.3ml×6瓶         2-8℃保存

标准品稀释液    3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

检测抗体-HRP    5ml×1瓶           10ml×1瓶          2-8℃保存

显色剂A液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

显色剂B液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

终止液          3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

20*洗涤缓冲液   25ml×1瓶          15ml×1瓶          2-8℃保存


需自备的设备及试剂：

1.450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.

3.Eppendorf 移液器.

4.蒸馏水或去离子水.

5.脱脂棉吸水纸.

6.37℃恒温箱.

7.100ml和1000ml量筒.

8.准备若干个标准品稀释管.

 
注意事项

1.试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。

2．加样：加样时，要控制加样速度，避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性；一般加样时间控制在10分钟内，如果样本数量过多，可使用多道移液器。

3.孵育：样品要在密闭的容器内进行孵育，严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

4.洗涤：洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，同时要消除板底残留的液体和手指痕迹，避免影响zui后的酶标仪读数。

5.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，10分钟左右)，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。

6.建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。

7.建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线，试用几个标本)，如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。

 
操作步骤

1. 取出试剂盒，于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。

2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。

3. 空白微孔中加入50μl的样品，空白对照加入50μl的蒸馏水；

4. 在样品孔中加入10μl的生物素；(不含空白对照孔,切忌：生物素只加样品孔！)

5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液；(不含空白对照孔)

6. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1小时；(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)

7. 充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；(浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释)

8. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干；

9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl；(不含空白对照孔)

10. 20-25℃下避光反应15分钟；

11.各孔加入50μl终止液，终止反应；

结果判断

1. 30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；

2. 以OD值为纵坐标，以标准品的浓度为横坐标，绘制曲线图；

3. 根据样品的OD值查找对应的浓度范围；